本規範使用技術所指的硬組織，包括；

（1）以松質骨爲主要結構的不脫鈣骨組織。

（2）其他(tā)含有較軟金屬支架材料的冠狀動脈血管等含金屬材料的組織。

不适用于牙齒、皮質骨以及含較大(dà)或堅硬金屬植體(tǐ)的骨組織，帶金屬支架的大(dà)動脈或大(dà)靜(jìng)脈血管，其他(tā)堅硬的材料。

2.1　制樣設備

2.1.1　切片機：自(zì)動輪轉式或平推式。

2.1.2　電熱(rè)鼓風(fēng)幹燥箱：調溫範圍50℃-200℃。

2.1.3　冰箱：溫度範圍 -20℃- 4℃。

2.1.4  普通光學生(shēng)物顯微鏡。

2.1.5　通風(fēng)櫃。

2.2　制樣工(gōng)具

2.2.1　鎢鋼刀：40゜

2.2.2　不鏽鋼尖鑷子。

2.2.3　粘附載玻片。

2.2.4　小毛刷。

2.2.5　記号筆。

2.2.6　壓片器。

2.2.7　Ⅰ型或圓形樣本夾。

2.3　材料

2.3.1　組織固定劑

a）中性福爾馬林組織固定液；

b）70%酒精。

2.3.2　組織脫水透明劑

a）酒精，使用濃度：50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%；

b）二甲苯；

警告——對人(rén)體(tǐ)有害，應在通風(fēng)櫃中使用。

c）丙酮。

警告——對人(rén)體(tǐ)有害，應在通風(fēng)櫃中使用。

2.3.3　樹脂浸潤包埋劑

a）甲基丙烯酸甲酯；

b）鄰苯二甲酰二丁酯；

c）過氧化苯甲酰；

d）聚甲基丙烯酸甲酯；

e）N,N,3,5-四甲基苯胺；

f）1-金剛烷硫醇。

警告——以上試劑均對人(rén)體(tǐ)有害，應在通風(fēng)櫃中使用。

2.3.4　脫塑劑

a）乙二醇乙醚乙酸酯；

b）乙二醇甲醚乙酸酯。

警告——以上試劑均對人(rén)體(tǐ)有害，應在通風(fēng)櫃中使用。

2.3.5　自(zì)凝樹脂。

警告——對人(rén)體(tǐ)有害，應在通風(fēng)櫃中使用。

2.3.6　載玻片規格：25mm×75mm，厚1mm-1.2mm。

2.3.7  蓋玻片規格：24mm×24mm，24mm×32mm，厚0.13mm-0.17mm。

3.1　登記編号與組織分(fēn)切

3.1.1　制作人(rén)員驗收标本時，應仔細核對組織标本數量、實驗編号等信息，并與受理(lǐ)人(rén)或送樣人(rén)核對是否一緻并确認。如(rú)有不同者，應立即與受理(lǐ)人(rén)或送樣人(rén)聯系予以調整修改。

3.1.2　按與送樣人(rén)确定的分(fēn)切方向，對組織進行分(fēn)切，登記編号，将組織放(fàng)置于脫水盒中，開始脫水。

3.2　組織脫水浸潤包埋

3.2.1　根據組織大(dà)小及取材部位，選擇正确的脫水程序，由低濃度酒精到高濃度酒精順序，去(qù)除組織内水份。

3.2.2　脫水後的組織經二甲苯進行透明，去(qù)除組織内的脂質。

3.2.3　經透明後的組織，于甲基丙烯酸甲酯與鄰苯二甲酸二丁酯混合液中浸潤，使樹脂完全浸入組織内部，浸潤液按加入聚合催化劑劑量的多少，分(fēn)爲一浸液，二浸液，三浸液，組織在每種浸液中浸潤二天。

3.2.4　浸潤完畢的組織于玻璃容器中包埋，包埋液爲新鮮配制的第三浸液。包埋聚合時間一般爲3-5天。

3.3　粘固

3.3.1　将包埋好的樹脂塊修整至合适大(dà)小，并暴露出組織面，且保證組織塊上下平行。

3.3.2　将修整好的組織塊用自(zì)凝樹脂粘接于制作好的底座上。

3.4　切片

警告——切片時容易傷手，應做好防護。

3.4.1　開啓切片機，将組織固定于樣本夾中，于自(zì)動輪轉式或平推式切片機上，修整出完整的組織面。

3.4.2　切取5微米厚的薄切片，用不鏽鋼尖頭鑷夾取切片，再用毛刷将切片于70%酒精溶液中展平。

3.4.3　将切片撈取在玻璃載玻片上，蓋上塑料薄膜，放(fàng)置于壓片器中夾緊，于50℃幹燥箱中過夜粘固。

3.5　脫塑

3.5.1  次日(rì)從(cóng)幹燥箱中取出切片，取下薄膜，放(fàng)于染色架中。

3.5.2　于乙二醇乙醚乙酸酯或乙二醇甲醚乙酸酯中脫去(qù)樹脂。

3.6　染色

硬組織切片可(kě)以進行石蠟切片所能進行的全部染色，隻是染色時間等條件做相(xiàng)應調整。

4.1　組織脫水透明及浸潤

組織脫水應充分(fēn)，二甲苯透明要适度，浸潤要完全。

4.2　組織包埋塊

組織包埋塊應保證組織位置平正，包埋液體(tǐ)要沒過組織不少于1cm，聚合時無氣泡。

4.3　切片厚度

一般爲5微米厚，但(dàn)爲觀察熒光素的切片厚度應爲10微米。

4.4　結構

切片應完整，厚度均勻，無裂紋，無破損。

4.5　編号

切片、包埋塊編号應于标本及送樣單一緻，并于包埋及切片時再次核對，簽字确認。

4.6　染色

按照(zhào)染色規範要求對硬組織薄切片進行相(xiàng)應染色，并做相(xiàng)應調整。

硬組織制片過程中使用的組織分(fēn)切機、切片機、鎢鋼刀、酒精、甲基丙烯酸甲酯等容易傷人(rén)或易發生(shēng)火(huǒ)災的危險品。應注意制作過程符合安全和環保要求：

a）制片人(rén)員分(fēn)切樣本時，應佩戴口罩，及防護手套；

b）制片人(rén)員在切片時，應注意切片刀的位置，取放(fàng)組織塊時應鎖定切片機，并放(fàng)下切片刀保護闆；

c）制片室應注意通風(fēng)、防火(huǒ)、配備換氣設備和消防器材；

d）組織處理(lǐ)及制片中産生(shēng)廢有機試劑，應裝入帶蓋的瓶中，注明标簽，按有關規定統一處理(lǐ)。

2022艾佧科(kē)技常規染色技術企業規範、硬組織磨片企業标準規範、骨形态計(jì)量與分(fēn)析企業标準規範，将會陸續推送，敬請期待。