[摘要] 目的：探討(tǎo)在犬下颌磨牙區即刻種植中，不同方式處理(lǐ)拔牙窩與種植體(tǐ)之間的間隙後的新骨形成情況。方法：選擇 6 條 1.5~2.0 歲的拉布拉多犬作爲實驗對象，在每條犬下颌骨中拔除兩側的第四前磨牙和第一磨牙，分(fēn)别植入4 顆牙種植體(tǐ)（Astra Tech R ，4.0 mm × 10 mm）。種植體(tǐ)和拔牙窩骨壁之間的近遠(yuǎn)中間隙分(fēn)别進行 3 種處理(lǐ)，分(fēn)爲空白(bái)組（NN 組）、膠質銀明膠海綿（Gelatamp） 組（EN 組）和 Gelatamp + 可(kě)吸收膠原膜（CM）組（EG 組）。術後 12 周收集标本， 進行顯微 CT 掃描和組織學分(fēn)析。采用 SPSS 25.0 軟件包進行統計(jì)學分(fēn)析。結果：牙種植術後 12 周存活率爲100%。顯微 CT 掃描結果顯示，新骨高度、骨礦物質密度（BMD）、骨體(tǐ)積分(fēn)數 （BV/TV）、骨表面積骨體(tǐ)積比（BS/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁數（Tb.N）和骨小梁間距（Tb.Sp）等指标，組間無顯著差異。組織學分(fēn)析結果顯示，新骨形成面積和種植體(tǐ)與骨接觸面積（BIC）在組間無統計(jì)學差異。結論：使用不同方式處理(lǐ)種植體(tǐ)與拔牙窩之間的間隙後的 12 周内，與空白(bái)對照(zhào)組相(xiàng)比，單獨放(fàng)置 Gelatamp 或與 CM 聯合使用，對種植體(tǐ)周圍新骨形成、BIC、BMD、BV/TV、BS/TV、Tb.Th、Tb.N 及 Tb.Sp 等均無顯著影(yǐng)響。

1  材料與方法

1.1 動物和設施

6 條拉布拉多犬，年(nián)齡 1.5~2.0 歲，實驗前體(tǐ)重約 20~25 kg。犬來(lái)自(zì)上海甲幹生(shēng)物科(kē)技有限公司，飼養于獨立犬舍中， 由專業飼養人(rén)員在整個過程中提供流質和軟質飲食。本實驗獲得(de)上海交通大(dà)學醫學院附屬第九人(rén)民(mín)醫院醫學實驗動物倫理(lǐ)委員會批準 [滬科(kē)動倫（2018）225]。

1.2 實驗材料與設備

種植體(tǐ) （4.0 mm×10.0 mm，OsseoSpeedTM，AstraTechR ，登士柏西諾德，美國(guó)）；膠質銀止血明膠海綿（Gelatamp，Coltene， 瑞士）；屏障膜 （Bio-GideR ，Geistlich，瑞士）；種植工(gōng)具盒（Astra TechR ，登士柏西諾德，美國(guó)）；種植機（Implantmed，W&HR ，奧地利）；無水乙醇、二甲苯（上海泰坦科(kē)技股份有限公司）；聚甲基丙烯酸甲酯（Sigma-aldrich，德國(guó)）；顯微 CT 機（Bruker，比利時）；組織切片機（Exakt，德國(guó)）；熒光倒置顯微鏡（Olympus，日(rì)本）；亞甲基藍、酸性品紅(hóng)染料（中國(guó)醫藥集團有限公司）。

1.3 實驗設計(jì)

拔除犬的每側下颌骨中的第四前磨牙和第一磨牙，将種植體(tǐ)分(fēn)别即刻植入新鮮牙槽窩中。對于種植體(tǐ)和拔牙窩近遠(yuǎn)中骨壁之間的間隙處理(lǐ)方式，1~3 号犬的左側爲 EG 組 （使用 Gelatamp 和 Bio-GideR ），右側爲 EN 組 （僅使用 Gelatamp），4~6 号犬右側爲NN 組（空白(bái)對照(zhào)）。術後 12 周進行安樂死，獲取組織标本。顯微 CT 掃描後，進行不脫鈣硬組織切片，随後染色，于顯微鏡下觀察，并拍(pāi)照(zhào)記錄。

1.4 方法與分(fēn)組處理(lǐ)

術前 24 h 對實驗犬禁食。使用麻醉劑 [鹽酸替來(lái)他(tā)明鹽酸唑拉西泮（舒泰 R50，0.1 mg/kg）和鹽酸塞拉嗪注射液（華牧 R ，1~2 mg/kg）] 皮下注射，待麻醉起效後，消毒，鋪巾。微創拔除下颌第四前磨牙（P4）和第一磨牙（M1）。測量牙槽窩尺寸，确認牙槽窩骨壁完好無損。根據操作指南(nán)制備種植窩洞，随後植入種植體(tǐ)（Astra TechR ，4.0 mm × 10 mm），均達到理(lǐ)想穩定性（扭矩均大(dà)于 35 N·cm）。種植體(tǐ)肩部與牙槽嵴頂平齊， 安裝覆蓋螺絲。每個種植體(tǐ)位于牙槽中隔，在種植體(tǐ)表面和新鮮牙槽窩骨壁之間存在間隙。其中，3 條犬的左側下颌骨爲 EG 組：種植體(tǐ)植入後，在近遠(yuǎn)中拔牙窩内各放(fàng)置 1 塊 Gelatamp，然後覆蓋 Bio-GideR膜（30 mm×40 mm）并嚴密縫合。右側爲 EN 組：種植體(tǐ)植入後，在近遠(yuǎn)中拔牙窩内各植入 1 塊 Gelatamp 并嚴密縫合。對于另外 3 條犬，其右側爲 NN 組，即空白(bái)對照(zhào)組：間隙内不填充任何材料，種植體(tǐ)植入後直接縫合創口。手術操作過程見圖 1。

術後待動物完全蘇醒後，送回籠舍。術後 7 d 注射抗生(shēng)素[注射用硫酸頭孢喹肟（華畜 R ，5 mg/kg)]，每天 1~2 次，連續注射 7 d。術後 14 d 喂食流質和軟質飲食。術後 12 周，對實驗犬進行安樂死。将手術區域的骨組織塊從(cóng)下颌骨截斷， 将未脫鈣的樣品固定于 10％甲醛溶液中。

1.5 顯微 CT 分(fēn)析

顯 微 CT 機 掃 描 标 本 後 ， 用 Microview 軟 件（Scanco Medical AG）處理(lǐ)數據。将 35 μm 厚的 2D圖像重建爲 3D 模型。感興趣體(tǐ)積（VOI）爲每個種植體(tǐ)從(cóng)粗螺紋水平處開始，靠近種植體(tǐ)的直徑 3 mm、高 4 mm 的圓柱形（圖 2）。用于評估骨質的主要參數如(rú)下（表 1）：骨礦物質密度（BMD）、骨體(tǐ)積分(fēn)數（BV/TV）、骨表面積骨體(tǐ)積比（BS/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁數（Tb.N）和骨小梁間距 （Tb.Sp）。使用顯微 CT 掃描得(de)到的數據在計(jì)算機上進行3D 重建，針對每個種植體(tǐ)，沿種植體(tǐ)縱向長軸，做一與牙槽骨水平長軸平行， 同時穿過種植體(tǐ)中軸的切面。在種植體(tǐ)的近遠(yuǎn)中測量靠近種植體(tǐ)的牙槽骨最高點到種植體(tǐ)頂端的距離(lí)， 得(de)到近遠(yuǎn)中新生(shēng)骨高度數值。

1.6 組織學分(fēn)析

固定後的标本先采用序列濃度乙醇進行脫水，随後使用聚甲基丙烯酸甲酯包埋， 待其完全固化後即可(kě)獲得(de)标本。使用硬組織切片機沿着種植體(tǐ)的近遠(yuǎn)中長軸切片。對切片進行研磨和抛光，厚度減小至20~25 μm 後，使用亞甲基藍酸性品紅(hóng)染色，在顯微鏡下觀察切片。測量區域 （ROI）是一個長度爲 5 mm、寬度爲 3 mm 的矩形， 位于種植體(tǐ)頂部下方最靠近種植體(tǐ)邊緣的區域；在該 ROI 區域内，能夠較爲準确地反映不同牙位的種植體(tǐ)近遠(yuǎn)中間隙的成骨情況和骨整合情況。種植體(tǐ)與新骨的接觸比例（BIC）=該區域中種植體(tǐ)與骨之間的接觸長度/種植體(tǐ)螺紋全長，種植體(tǐ)周圍新骨面積比例=新骨面積/總 ROI 面積。

1.7 統計(jì)學分(fēn)析

采用 SPSS 25.0 軟件包進行統計(jì)學分(fēn)析。數據以x±s表示。通過 Shapiro-Wilk 檢驗進行數據正态性評估。對于正态分(fēn)布數據，進一步行單因素方差分(fēn)析，評估 2 組之間的差異。對于不滿足正态分(fēn)布的數據，使用非參數檢驗，評估組間差異。P<0.05 爲差異有統計(jì)學意義。

2  結果

手術後所有部位均愈合良好， 未發生(shēng)種植體(tǐ)脫落和周圍炎症，種植體(tǐ)存留率爲 100%。

2.1 顯微 CT 結果

從(cóng)顯微 CT 近遠(yuǎn)中截面圖像可(kě)見， 每組種植體(tǐ)頸部周圍均有不同程度的硬組織吸收， 頸部以下均有新骨形成（圖 2）。EN 組和 EG 組的 BMD 相(xiàng)差不大(dà)，均稍高于 NN 組。EN 組與 EG 組的 BVF 略微高于 NN 組。BS/BV 和 Tb.Th 在組間差異較小。EN 組的 Tb.N 最低，NN 組的 Tb.N 最高。Tb.Sp 的趨勢則與之相(xiàng)反。所有上述指标在組間的差異均無統計(jì)學意義（P>0.05），VOI 區的測量結果見表 2。

2.2 3D 重建和新骨高度

近遠(yuǎn)中骨高度測量結果見圖 3、表 3。此處骨高度爲種植體(tǐ)頂部至種植體(tǐ)周圍牙槽骨的距離(lí)， 負值表示骨高度在種植體(tǐ)頂部以下。該指标在臨床上常使用 X 線片進行測量， 通常 定義爲邊緣 骨吸收（marginal bone loss，MBL）。近中骨高度在 EN 組最低， EG 組最高。遠(yuǎn)中骨高度在 NN 組最低，EN 組最高。近遠(yuǎn)中平均骨高度在 EN 組與 EG 組相(xiàng)差不大(dà)，NN 組略低于兩者。以上所有組間差異均無統計(jì)學意義（P>0.05）。

2.3 組織學觀察和組織形态計(jì)量學

組織學切片和統計(jì)結果見圖 4。切片中，黑(hēi)色部分(fēn)爲種植體(tǐ)，藍色部分(fēn)爲結締組織，鮮紅(hóng)色部分(fēn)爲新生(shēng)骨。EN 組的新骨面積比例略高于 EG 組和 NN組。骨-種植體(tǐ)接觸比例（BIC）中，EG 組最高，EN 組次之，NN 組最低。以上組間差異均無統計(jì)學意義（P>0.05，表 4）。

2.4 間隙大(dà)小對實驗結果的影(yǐng)響

本研究使用第四前磨牙和第一磨牙的拔牙窩，術中測量可(kě)得(de)第四前磨牙的單側拔牙窩平均尺寸爲近遠(yuǎn)中徑 4 mm、頰舌徑 4 mm、冠根向 12 mm；第一磨牙單側拔牙窩平均尺寸爲近遠(yuǎn)中徑 9 mm、頰舌徑7 mm、冠根向 13 mm。将每組數值根據所屬拔牙位點分(fēn)爲前磨牙組和磨牙組， 以探討(tǎo)拔牙窩間隙大(dà)小是否對種植體(tǐ)周圍成骨産生(shēng)影(yǐng)響。結果發現，各組數據無統計(jì)學差異（P>0.05，表 5）。

3  討(tǎo)論